Uma preparação de PRP pobre em leucócitos (LP-PRP) foi realizada utilizando o protocolo do sistema NeutroFree PRP, que consiste na coleta de um grande volume de sangue total e um método de dupla centrifugação, acessando a camada leucoplaquetária após a segunda centrifugação para garantir uma maior recuperação de plaquetas.
Visão Geral do Processo
- Coleta de Sangue Total:
- O anticoagulante ACD-A é utilizado na proporção de 1:9 para a coleta. Duas seringas de 60 mL são preenchidas com 3 mL de anticoagulante ACD-A cada.
- Em seguida, 27 mL de sangue total é coletado em cada uma das duas seringas de 60 mL (30 mL de conteúdo em cada).
- Uma seringa coletou 28 mL de sangue total, e uma amostra basal de 1 mL foi coletada para análise do hemograma.
- Primeira Centrifugação:
- A primeira centrifugação das seringas de 60 mL é realizada a um RCF de 1.250 por 20 minutos, calculado com um Rmax de 155 mm, medido até a superfície do êmbolo interno da seringa. Para a centrífuga utilizada, isso resultou em um RPM de 2.680.
- Após a primeira centrifugação, a camada de PPP é cuidadosamente aspirada, deixando alguns mL de plasma, garantindo que a camada leucoplaquetária não seja perturbada. Em seguida, uma amostra de 1 mL do PPP aspirado foi coletada para análise do hemograma.
- Extração da Camada Leucoplaquetária:
- Após a aspiração do PPP, a interface entre os eritrócitos e a camada leucoplaquetária permanece intacta e pronta para extração.
- O PPP restante e a camada leucoplaquetária são então extraídos junto com uma pequena quantidade da camada de eritrócitos (10 mL) em uma nova seringa de 20 mL, garantindo que toda a camada leucoplaquetária e as plaquetas restantes sejam coletadas para a segunda centrifugação.
- Segunda Centrifugação:
- A segunda centrifugação é realizada com uma seringa de 20 mL a um RCF de 380 por 5 minutos, calculado com um Rmax de 142 mm, medido até a superfície do êmbolo interno da seringa. Para a centrífuga utilizada, isso resultou em um RPM de 1.550.
- Após a segunda centrifugação, a camada de plasma, agora com 5 mL de PRP altamente concentrado, é aspirada, novamente parando antes da interface com os eritrócitos para evitar a diluição e a coleta de granulócitos.
- Uma amostra de 1 mL dos 5 mL de LP-PRP preparado é coletada para análise do hemograma.
Análises de Hemograma
Sangue Total Basal
PRP Pobre em Leucócitos (LP-PRP) – 6.82x
Plasma Pobre em Plaquetas (PPP)
Tabela de Dados
| Parâmetro | Sangue Total Basal | PRP | PPP |
|---|---|---|---|
| RBC | 3.67 (10^12/L) | 0.03 (10^12/L) | 0.00 (10^12/L) |
| HCT | 33.8% | ||
| MCV | 92.1 fl | ||
| RDW% | 14.7 | ||
| RDWa | 78.7 fl | ||
| HGR | 10.2 g/dL | 0.2 g/dL | 0.0 g/dL |
| MCH | 27.8 pg | ||
| MCHC | 30.2 g/dL | ||
| PLT | 130 (10^9/L) | 887 (10^9/L) | 13 (10^9/L) |
| PCT | 0.1% | 0.64% | |
| MPV | 8.1 fl | 7.3 fl | |
| PDW | 12.4 fl | 11.0 fl | |
| LPCR | 19.2% | 11.5% | |
| WBC | 3.3 (10^9/L) | 1.8 (10^9/L) | 0.0 (10^9/L) |
| LYM | 1.5 (45%) | 1.6 (90.7%) | |
| GRAN | 1.5 (44.4%) | 0.1 (5.6%) | |
| MTD | 0.3 (10.6%) | 0.1 (3.7%) | |
| Plaquetas Totais (em 10^9) | 7.800 | 4.435 | 0.065 |
| Percentual de Recuperação de Plaquetas | 56.86% | ||
| Redução % RBC | 99.93% | 100% | |
| Redução % WBC | 95.45% | 100% | |
| Redução % LYM | 91.11% | 100% | |
| Redução % GRAN | 99.44% | 100% | |
| Redução % MTD | 97.22% | 100% | |
| Porcentagem de Recuperação de WBC | 4.55% | 0% | |
| Concentração de Plaquetas | 6.82x |
Observações de Hemograma
Observações do PRP
- Fator de concentração de 6.82x em 5 mL de PRP preparado.
- Alta recuperação de plaquetas, superior a 56%.
- Mais de 4,4 bilhões de plaquetas para fornecer terapia eficaz.
- Redução de eritrócitos em quase 100%.
- Redução de granulócitos em quase 100%.
- Leucócitos (granulócitos, linfócitos, monócitos) significativamente reduzidos em mais de 90%.
Observações do PPP
- Praticamente 100% dos eritrócitos e leucócitos removidos do plasma.
- O PPP é praticamente desprovido de células.
- Baixa perda de plaquetas, apenas 8.3%.
Recuperação e Quantidade de Plaquetas vs Fator de Concentração
Recuperação e Quantidade de Plaquetas
A porcentagem de plaquetas recuperadas do sangue total e a contagem final de plaquetas do PRP preparado são indicadores mais precisos da eficácia terapêutica e da eficiência de concentração do sistema. O fator de concentração final é um meio pouco confiável para determinar a viabilidade de qualquer sistema de PRP, pois o fator de concentração é determinado pelo volume final, que pode ser facilmente manipulado.
Contagens mais altas de plaquetas nas preparações de PRP demonstraram melhorar a cicatrização de tecidos moles e reduzir os tempos de recuperação em aplicações ortopédicas e de medicina esportiva. Os benefícios terapêuticos do PRP estão diretamente relacionados à quantidade de plaquetas (a dosagem) e à subsequente disponibilidade de fatores de crescimento no local da lesão.
Considerações sobre a Concentração
Os fatores de concentração do PRP são determinados pela quantidade de plaquetas e pelo volume da preparação de PRP. Um volume maior diluirá o fator de concentração final. O volume de PRP preparado é determinado pelo PPP restante após a aspiração da primeira centrifugação. Esta preparação de PRP criou 5 mL de LP-PRP com uma contagem de 4,435 bilhões de plaquetas, levando a um fator de concentração de 6,82x. Possíveis volumes de preparação e fatores de concentração:
- 5 mL de PRP (4,435 bilhões de plaquetas) = 6.82x
- 4 mL de PRP (4,435 bilhões de plaquetas) = 8.53x
- 3 mL de PRP (4,435 bilhões de plaquetas) = 11.37x
- 2 mL de PRP (4,435 bilhões de plaquetas) = 17.06x
- 1 mL de PRP (4,435 bilhões de plaquetas) = 34.12x
Como pode ser visto, o fator de concentração pode não ser tão importante quanto a contagem total de plaquetas.
Por que PRP pobre em leucócitos?
A principal função do sistema NeutroFree PRP é criar PRP de alta qualidade pobre em leucócitos (LP-PRP), que é superior para aplicações intra-articulares onde a inflamação é contraproducente. A inflamação pode exacerbar os danos nas articulações e prejudicar o processo de cicatrização. Certos leucócitos, particularmente neutrófilos e macrófagos, liberam citocinas como IL-1 e TNF-α, que contribuem para a inflamação e a degradação da cartilagem nas articulações. Ao reduzir o conteúdo de leucócitos, o LP-PRP minimiza a liberação dessas citocinas inflamatórias, promovendo um ambiente mais favorável à reparação e regeneração dos tecidos. Isso torna o LP-PRP uma escolha ideal para tratar condições articulares, como a osteoartrite, onde controlar a inflamação é crucial para uma cicatrização eficaz.
Benefícios do Sistema NeutroFree PRP
Baixo Custo
Uma métrica interessante a considerar ao avaliar qualquer sistema de concentração de PRP é o custo por bilhão de plaquetas. Uma única preparação de PRP usando este sistema custa aproximadamente R$80 BRL. O PRP preparado tem uma dosagem de 4,435 bilhões de plaquetas, tornando o custo por bilhão de plaquetas R$18,05.
Alta Recuperação de Plaquetas
Devido ao protocolo do sistema e ao uso de seringas, é possível uma recuperação de plaquetas consistentemente alta, superior a 50%.
Coleta Consistente e Precisa de Plaquetas
Evitando o uso de agulhas para a coleta de plaquetas e confiando na precisão dos êmbolos para a seleção uniforme de plaquetas, o sistema NeutroFree PRP é capaz de isolar efetivamente as plaquetas de leucócitos indesejáveis.
Prevenção da Ativação Mecânica das Plaquetas
Concentrando as plaquetas na camada leucoplaquetária e acessando-as após a segunda centrifugação, evitamos a concentração de um pellet de plaquetas que, inadvertidamente, leva à ativação de algumas plaquetas por meio das forças mecânicas da centrifugação.
Referências
- Mishra, A., et al. (2014). Platelet-rich plasma in orthopedic applications: evidence-based recommendations for treatment. Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons, 22(18), 469-470.
- Sundman, E. A., et al. (2014). The anti-inflammatory and matrix restorative mechanisms of platelet-rich plasma in osteoarthritis. American Journal of Sports Medicine, 42(1), 35-41.
- Riboh, J. C., et al. (2016). Effect of leukocyte concentration on the efficacy of platelet-rich plasma in the treatment of knee osteoarthritis. American Journal of Sports Medicine, 44(3), 792-800.
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