Formulação de Anticoagulante ACD-A

Antes de começar, confira a nossa análise comparativa dos anticoagulantes!

O ACD-A (Solução de Ácido Citrato Dextrose A) é um anticoagulante amplamente utilizado na coleta e preservação de sangue, conhecido por sua eficácia em prevenir a coagulação ao quelar íons de cálcio. Esta solução, composta principalmente de ácido cítrico, citrato de sódio e dextrose, desempenha um papel crucial na manutenção da viabilidade e funcionalidade dos componentes sanguíneos coletados. Especificamente, o ACD-A tem benefícios significativos in vivo para a terapia com Plasma Rico em Plaquetas (PRP), pois preserva a integridade e a atividade das plaquetas, melhorando suas propriedades regenerativas quando reintroduzidas no corpo. Isso torna o ACD-A indispensável em tratamentos médicos que utilizam PRP para acelerar a reparação de tecidos e promover a cura.

O que é realmente o ACD-A?

O ACD-A (Solução de Ácido Citrato Dextrose A) é uma solução anticoagulante especializada usada principalmente na coleta e preservação de sangue. A formulação do ACD-A inclui os seguintes componentes:

1. Ácido Cítrico Monoidratado (C₆H₈O₇·H₂O): 8,0 gramas por litro
2. Citrato de Sódio Dihidratado (Na₃C₆H₅O₇·2H₂O): 22,0 gramas por litro
3. Dextrose Monoidratada (D-Glucose, C₆H₁₂O₆·H₂O): 24,5 gramas por litro

Esses ingredientes são dissolvidos em água estéril para compor a solução final. A solução deve ter um pH esperado entre 4,5 e 5,5.

Observe que, se usar ácido cítrico anidro, a concentração será de 7,3g/L de ácido cítrico.

Função e Mecanismo

• Ácido Cítrico e Citrato de Sódio: Esses componentes trabalham juntos para quelar íons de cálcio no sangue. O cálcio é um fator crucial na cascata de coagulação do sangue, e ao se ligar ao cálcio, os citratos efetivamente previnem a coagulação.
• Dextrose: Serve como fonte de energia para as células, particularmente glóbulos vermelhos e plaquetas, ajudando a manter sua viabilidade e funcionalidade durante o armazenamento.

Benefícios In Vivo para PRP (Plasma Rico em Plaquetas)

Quando usado na preparação de PRP (Plasma Rico em Plaquetas), o ACD-A oferece benefícios específicos in vivo:

• Preservação da Função das Plaquetas: O ACD-A ajuda a manter a integridade e as propriedades funcionais das plaquetas, o que é crucial para a eficácia terapêutica do PRP.
• Potencial Regenerativo Aprimorado: Ao preservar a atividade das plaquetas, o ACD-A garante que os fatores de crescimento e outras moléculas bioativas liberadas pelas plaquetas permaneçam potentes, melhorando os processos de reparação de tecidos e cicatrização quando o PRP é administrado aos pacientes.

Uso Prático

Na prática, o ACD-A é misturado ao sangue em uma proporção específica durante a coleta para prevenir a coagulação e manter a qualidade dos componentes sanguíneos coletados. Isso o torna inestimável em várias aplicações médicas, incluindo transfusões de sangue, aférese e terapias PRP, onde a manutenção da integridade funcional das células sanguíneas e das plaquetas é essencial.

As proporções comuns de ACD-A para sangue total na preparação de PRP são entre 1:7 e 1:9.

Formulando uma Solução de ACD-A

LEIA ANTES DE CONTINUAR: Certifique-se de que toda a vidraria e ferramentas de aço inoxidável utilizadas, incluindo béqueres de vidro, colheres de medição, copos de balança ou qualquer outro item que entre em contato com qualquer substância química ou produto, estejam despirogenizados de acordo com nosso protocolo de Despirogenização e Esterilização Avançada.

Formular o ACD-A (Solução de Ácido Citrato Dextrose A) é um processo meticuloso que requer medição precisa e manuseio cuidadoso de seus componentes para garantir sua eficácia como anticoagulante. É importante notar que um conhecimento prévio de química e procedimentos laboratoriais é essencial para qualquer pessoa que tente formular o ACD-A. Este guia não abrange protocolos básicos de segurança laboratorial ou o conhecimento químico fundamental necessário. Nas seções a seguir, detalharemos o processo passo a passo para formular o ACD-A, destacando os materiais necessários, equipamentos e etapas procedimentais para alcançar uma solução consistente e eficaz. Quer você esteja preparando o ACD-A para uso laboratorial, aplicações clínicas ou propósitos de pesquisa, estas instruções o guiarão pelo processo, garantindo precisão e segurança. No entanto, certifique-se de compreender totalmente os riscos e possuir a expertise apropriada antes de prosseguir.

Materiais e Equipamentos Necessários

1. Luvas Estéreis
   • Uso: Luvas estéreis para manuseio de componentes estéreis.
2. Máscara cirúrgica
   • Uso: Mantenha a esterilidade do ambiente de trabalho.
3. Seringa Luer Lock de 20 mL
   • Uso: Preparar a solução ACD-A misturando água estéril.
4. Agulha 25 x 0,70 mm (22G x 1)
   • Uso: Extrair água estéril de ampolas.
5. Tiras de Teste de pH
   • Uso: Verificar o nível de pH da solução ACD-A preparada.
6. Copo de Vidro de 50 mL
   • Uso: Misturar todos os componentes constituintes.
7. Colher de Chá
   • Uso: Transferir produtos químicos.
8. Balança Analítica
   • Uso: Pesar todos os componentes constituintes.
   • Nota: Requer precisão de 0,001 gramas.
9. USP Grade Dextrose Monohydrate (D-Glucose, C₆H₁₂O₆·H₂O)
   • Uso: Componente constituinte do ACD-A.
10. USP Grade Sodium Citrate Dihydrate (Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)
    • Uso: Componente constituinte do ACD-A.
11. USP Grade Citric Acid Monohydrate (C₆H₈O₇·H₂O)
    • Uso: Componente constituinte do ACD-A.
12. 40 mL de Água Estéril para Injeção
    • Uso: Preparar a solução ACD-A e preparar o filtro de seringa.
13. Bastão de Vidro
    • Uso: Agitar os constituintes no copo de vidro para obter uma mistura homogênea.
14. Filtro de Seringa Estéril de 30 mm, Membrana PES, 0,22 Microns
    • Uso: Filtrar e esterilizar a solução ACD-A antes de adicioná-la ao frasco estéril de 30 mL.
    • Nota: Um filtro de 0,22 µm é suficiente para remover bactérias e partículas, mas não elimina citotoxinas, endotoxinas ou pirógenos. Para aplicações in vivo, uma membrana de polietersulfona (PES) é normalmente utilizada devido à sua biocompatibilidade e baixa afinidade por proteínas. Vidrarias e reagentes devem estar estéreis.
15. Agulha 25 x 0,70 mm (22G x 1)
    • Uso: Encher o frasco de ACD-A com a solução ACD-A esterilizada.
16. Lenço Estéril
    • Uso: Limpar o tampão de borracha do frasco de ACD-A antes de adicionar a solução.
17. Frasco de Armazenamento de ACD-A, 30 mL
    • Uso: Armazenar a solução anticoagulante ACD-A.
    • Nota: O frasco deve estar esterilizado e livre de citotoxinas, endotoxinas e pirógenos. Utilize técnicas adequadas de esterilização.

Assista ao Vídeo de Instrução

Neste vídeo, o processo de formulação do ACD-A passo a passo é revelado. Assistir a este vídeo lhe dará uma compreensão visual de cada etapa, garantindo que você possa acompanhar com facilidade.

Instruções

Nota: Todo o material de vidro utilizado deve ser devidamente esterilizado previamente por meio de depirossinização por calor seco a 250°C durante trinta minutos antes do uso.

1. Pese 0,660 gramas de Citrato de Sódio Dihidratado, e adicione ao copo de vidro.
2. Pese 0,240 gramas de Ácido Cítrico Monoidratado, e adicione ao copo de vidro.
3. Pese 0,735 gramas de Dextrose Monoidratada, e adicione ao copo de vidro.
4. Prepare a seringa de 20 mL acionando o êmbolo algumas vezes. Isso ajudará a soltar o êmbolo.
5. Use a agulha 22G para retirar 30 mL de água estéril das ampolas e adicione essa água ao copo de vidro.
   • Nota: A água estéril é preferida por ser livre de citotoxinas, endotoxinas e pirógenos que poderiam causar uma reação adversa para uso in vivo.
6. Após adicionar a água, mexa bem a mistura até obter uma solução homogênea. Alguns cristais permanecerão no fundo e podem ser esmagados com a extremidade da haste de vidro.
7. Use um medidor de pH para medir o pH da solução. Ajuste o pH para entre 4,5 e 5,5 usando pequenas quantidades de solução de ácido cítrico ou citrato de sódio conforme necessário. No entanto, se as proporções de concentração foram seguidas, a solução já deve estar ajustada.
   • Nota: Pingue uma pequena quantidade da solução sobre a fita de teste em vez de mergulhá-la diretamente na solução, para evitar contaminação.
8. Use o lenço estéril para higienizar o tampão de borracha do frasco de armazenamento de 30 mL.
9. Prepare o filtro de seringa anexando-o a uma agulha estéril 22G, tendo cuidado para não contaminar o lado estéril do filtro.
10. Usando a ampola restante de 10 mL de água estéril, puxe a água para dentro de uma seringa de 20 mL. Use essa água para preparar o filtro estéril empurrando-a através do filtro para um recipiente de descarte. Este passo garante que quaisquer fibras soltas ou partículas no lado estéril do filtro sejam eliminadas e não contaminem a solução final.
11. Tampe a montagem da agulha/filtro estéril e desconecte da seringa. Reserve.
12. Usando a seringa de 20 mL, aspire a solução de ACD-A do copo de vidro. Note que 10 mL da solução permanecerão no copo e precisarão ser processados em uma etapa subsequente.
13. Anexe a montagem da agulha/filtro estéril à seringa de 20 mL e proceda a preencher o frasco de 30 mL com a solução de ACD-A.
14. Uma vez que a seringa de 20 mL esteja vazia, desconecte a seringa da montagem da agulha/filtro, deixando a montagem no tampão de borracha do frasco.
15. Aspire a solução de ACD-A restante do copo de vidro usando a seringa. Reanexe a seringa à montagem da agulha/filtro sem removê-la do tampão de borracha e preencha o frasco com o restante da solução.
16. Verifique se a solução dentro do frasco está livre de partículas.
17. Limpe o frasco e rotule-o com o conteúdo e a data de formulação.

Verificações Finais e Armazenamento

Certifique-se de que a solução esteja clara e livre de partículas. Recomenda-se que a solução seja armazenada em temperatura ambiente, 24 °C (75 °F); no entanto, a solução pode ser armazenada entre 15 °C (59 °F) e 30 °C (86 °F). Proteja da congelação e minimize a exposição ao calor excessivo. O ACD-A deve ser utilizado dentro de trinta dias após a formulação.

A limitação na duração do armazenamento é principalmente devido a preocupações com a estabilidade e esterilidade da solução ao longo do tempo. Componentes como ácido cítrico, citrato de sódio e dextrose podem degradar ou reagir ao longo de períodos prolongados, potencialmente reduzindo a eficácia da solução como anticoagulante. Além disso, manter um ambiente estéril é crucial para prevenir a contaminação microbiana, o que é mais difícil de garantir em períodos de armazenamento mais longos.

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